在涉及蛋白組學(xué)的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常需要檢測(cè)溶液中的蛋白質(zhì)濃度。常用的蛋白定量的方法分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是銅還原法，原理是在堿性環(huán)境中利用肽鍵將二價(jià)銅還原為一價(jià)銅，間接反映蛋白質(zhì)的數(shù)量，如雙縮脲反應(yīng)、改良Lowry法、BCA法等；另一類(lèi)是染料結(jié)合法，原理是通過(guò)染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合，使溶液的光吸收峰發(fā)生改變，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)的數(shù)量，*常用的染料是考馬斯亮藍(lán)G250（Bradford法），以及一些金屬-染料復(fù)合物，如兒茶酚-鉬酸復(fù)合物、鄰苯三酚紅-鉬酸復(fù)合物等。
在蛋白質(zhì)提取和蛋白電泳實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常會(huì)用到還原劑和去垢劑（表面活性劑），上述蛋白定量方法往往與這些還原劑和去垢劑不兼容：還原劑對(duì)銅還原法有強(qiáng)烈干擾作用，即使在沒(méi)有蛋白的情況下也能產(chǎn)生顯色反應(yīng)，無(wú)論是樣品本身含有的抗壞血酸，或是緩沖液中含有的巰基乙醇、二硫蘇糖醇（DTT）等，均能形成干擾；去垢劑則對(duì)染料結(jié)合法有強(qiáng)烈干擾作用，如SDS、Triton X100、Tween-20等，會(huì)與染料結(jié)合使溶液光吸收峰發(fā)生改變；高濃度的去垢劑也會(huì)對(duì)銅還原法產(chǎn)生干擾，但是在常用濃度下一般沒(méi)有影響。這些還原劑和去垢劑在蛋白提取緩沖液和電泳相關(guān)緩沖液中很常見(jiàn)，傳統(tǒng)上解決這些干擾的方法是通過(guò)蛋白沉淀法去除干擾成分，然后重懸蛋白進(jìn)行濃度測(cè)定，其缺點(diǎn)在于顯著增大了工作量，并且增加了實(shí)驗(yàn)誤差。
Bradford法不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，也不受還原劑的影響，但是去垢劑可以造成強(qiáng)烈干擾。通過(guò)與染料結(jié)合，去垢劑抬高背景光吸收值，使得檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)范圍發(fā)生改變，甚至無(wú)法檢測(cè)。本產(chǎn)品通過(guò)對(duì)Bradford法的改進(jìn)，采用特殊配方，消除去垢劑的干擾，可兼容6% SDS、4% Tween20、2% Triton-X100、2% NP40，可耐受各種RIPA裂解液，對(duì)蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的各種緩沖液均可兼容。 |
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